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ARTICLES1. 基因調取與腺病毒穿梭質粒的構建 針對客戶感興趣的基因,從NCBI網站上得到目的基因CDS區信息并設計引物,從文庫中調出基因,克隆至腺病毒系統穿梭載體(Pshuttle-CMV)。如需克隆的為基因突變體,則將基因克隆至穿梭載體后,行若干次點突變,至得到需要的突變體為止。
siRNA表達載體構建可應用于:(1)作為后基因組時代基因功能分析的有力工具;(2)基因組學、細胞信號傳導通路分析;(3)藥物靶點篩選、疾病治療。
質粒構建 流程: 1. 目的基因的PCR擴增 2. PCR產物純化 3. 載體和PCR產物進行雙酶切 4. 膠回收 5. 載體與目的基因的連接 6. 轉化 7. 菌落PCR鑒定 8. 重組質粒的抽提
慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的序列的效果。對于一些較難轉染的細胞,如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等,使用慢病毒載體,能大大提高目的基因或目的shRNA的轉導效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加,能夠比較方便快捷地實現目的基因或目的shRNA的長期、穩定表達。
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